Tīra Saposhnikovia divaricata eļļa sveču un ziepju pagatavošanai vairumtirdzniecības difuzora ēteriskā eļļa, jauna niedru degļu difuzoriem

īss apraksts:

 

2.1. SDE sagatavošana

SD sakneņi tika iegādāti kā žāvēts augs no Hanherb Co. (Guri, Koreja). Augu materiālu taksonomisko apstiprināja Dr. Go-Ya Choi no Korejas Austrumu medicīnas institūta (KIOM). Sertifikāta paraugs (numurs 2014 SDE-6) tika deponēts Korejas Standarta augu resursu herbārijā. Žāvēti SD sakneņi (320 g) tika divas reizes ekstrahēti ar 70% etanolu (ar 2 stundu atplūdes gāzi), un pēc tam ekstrakts tika koncentrēts pazeminātā spiedienā. Novārījums tika filtrēts, liofilizēts un uzglabāts 4°C temperatūrā. Žāvēta ekstrakta iznākums no neapstrādātiem izejmateriāliem bija 48,13% (m/m).

 

2.2. Kvantitatīva augstas veiktspējas šķidruma hromatogrāfijas (HPLC) analīze

Hromatogrāfiskā analīze tika veikta ar HPLC sistēmu (Waters Co., Milford, MA, ASV) un fotodiodu matricas detektoru. SDE HPLC analīzei primāraisO-glikozilcimifugīna standarts tika iegādāts no Korejas Tradicionālās medicīnas nozares veicināšanas institūta (Kjonsana, Koreja), unsek-O-glikozilhamaudols un 4′-O-β-D-glikozil-5-O-metilvisamminols tika izolēts mūsu laboratorijā un identificēts ar spektrālās analīzes palīdzību, galvenokārt ar NMR un MS.

SDE paraugi (0,1 mg) tika izšķīdināti 70% etanolā (10 ml). Hromatogrāfiskā atdalīšana tika veikta ar XSelect HSS T3 C18 kolonnu (4,6 × 250 mm, 5μm, Waters Co., Milford, MA, ASV). Mobilā fāze sastāvēja no acetonitrila (A) un 0,1% etiķskābes ūdenī (B) ar plūsmas ātrumu 1,0 ml/min. Tika izmantota šāda daudzpakāpju gradienta programma: 5% A (0 min), 5–20% A (0–10 min), 20% A (10–23 min) un 20–65% A (23–40 min). Detekcijas viļņa garums tika skenēts pie 210–400 nm un reģistrēts pie 254 nm. Injekcijas tilpums bija 10,0μL. Trīs hromonu noteikšanai tika sagatavoti standarta šķīdumi ar galīgo koncentrāciju 7,781 mg/ml (prim-O-glikozilcimifugīns), 31,125 mg/ml (4′-)O-β-D-glikozil-5-O-metilvisaminols) un 31,125 mg/ml (sek-O-glikozilhamaudols) metanolā un uzglabāts 4°C temperatūrā.

2.3. Pretiekaisuma aktivitātes novērtējumsIn vitro

2.3.1. Šūnu kultūra un paraugu apstrāde

RAW 264.7 šūnas tika iegūtas no Amerikas Tipisko Kultūru Kolekcijas (ATCC, Manassas, VA, ASV) un audzētas DMEM vidē, kas saturēja 1% antibiotiku un 5,5% FBS. Šūnas tika inkubētas mitrinātā atmosfērā ar 5% CO2 37°C temperatūrā. Lai stimulētu šūnas, barotne tika aizstāta ar svaigu DMEM vidi un lipopolisaharīdu (LPS, Sigma-Aldrich Chemical Co., St. Louis, MO, ASV) 1μg/ml tika pievienots SDE klātbūtnē vai bez tās (200 vai 400μg/ml) vēl 24 stundas.

2.3.2. Slāpekļa oksīda (NO), prostaglandīna E2 (PGE2), audzēja nekrozes faktora noteikšanaα(TNF-α) un interleikīna-6 (IL-6) ražošana

Šūnas tika apstrādātas ar SDE un stimulētas ar LPS 24 stundas. NO ražošana tika analizēta, mērot nitrītu, izmantojot Grīsa reaģentu saskaņā ar iepriekšēju pētījumu [12Iekaisuma citokīnu PGE2, TNF- sekrēcijaα, un IL-6 tika noteikts, izmantojot ELISA komplektu (R&D systems) saskaņā ar ražotāja norādījumiem. SDE ietekme uz NO un citokīnu veidošanos tika noteikta pie 540 nm vai 450 nm, izmantojot Wallac EnVision.™mikroplašu lasītājs (PerkinElmer).

2.4. Antiosteoartrīta aktivitātes novērtējumsIn vivo

2.4.1. Dzīvnieki

Tēviņu Sprague-Dawley žurkas (7 nedēļas vecas) tika iegādātas no Samtako Inc. (Osana, Koreja) un turētas kontrolētos apstākļos ar 12 stundu gaismas/tumsas ciklu°C un% mitruma. Žurkām tika nodrošināta laboratorijas barība un ūdens.neierobežotiVisas eksperimentālās procedūras tika veiktas saskaņā ar Nacionālo veselības institūtu (NIH) vadlīnijām un apstiprinātas Tedžonas universitātes (Tedžona, Korejas Republika) Dzīvnieku aprūpes un izmantošanas komitejā.

2.4.2. OA indukcija ar MIA žurkām

Dzīvnieki tika nejaušināti iedalīti ārstēšanas grupās pirms pētījuma uzsākšanas (katrā grupā). MIA šķīdums (3 mg/50μAnestēzijas laikā, ko izraisīja ketamīna un ksilazīna maisījums, labā ceļa locītavas telpā tieši injicēja 0,9 % l. Žurkas tika nejauši sadalītas četrās grupās: (1) fizioloģiskā šķīduma grupa bez MIA injekcijas, (2) MIA grupa ar MIA injekciju, (3) ar SDE ārstētā grupa (200 mg/kg) ar MIA injekciju un (4) ar indometacīnu (IM) ārstētā grupa (2 mg/kg) ar MIA injekciju. Žurkām SDE un IM tika ievadītas iekšķīgi 1 nedēļu pirms MIA injekcijas 4 nedēļas. Šajā pētījumā izmantotā SDE un IM deva bija balstīta uz iepriekšējos pētījumos izmantotajām devām [10,13,14].

2.4.3. Pakaļķepas svara nestspējas sadalījuma mērījumi

Pēc osteoartrīta (OA) indukcijas tika izjaukts pakaļķepu svara nestspējas sākotnējais līdzsvars. Lai novērtētu svara nestspējas izmaiņas, tika izmantots rīcībnespējas testeris (Linton instrumentation, Norfolk, Apvienotā Karaliste). Žurkas tika uzmanīgi ievietotas mērīšanas kamerā. Pakaļkājas radītais svara nestspējas spēks tika aprēķināts vidēji 3 sekunžu periodā. Svara sadalījuma attiecība tika aprēķināta pēc šāda vienādojuma: [svars uz labās pakaļkājas/(svars uz labās pakaļkājas + svars uz kreisās pakaļkājas)] × 100 [15].

2.4.4. Seruma citokīnu līmeņa mērījumi

Asins paraugi tika centrifugēti ar 1500 g 10 minūtes 4°C temperatūrā; pēc tam serums tika savākts un uzglabāts –70°C temperatūrā līdz lietošanai. IL-1 līmenisβ, IL-6, TNF-αun PGE2 līmenis serumā tika mērīts, izmantojot ELISA komplektus no R&D Systems (Mineapolisa, Minesota, ASV) saskaņā ar ražotāja norādījumiem.

2.4.5. Reāllaika kvantitatīvā RT-PCR analīze

Kopējā RNS tika ekstrahēta no ceļa locītavas audiem, izmantojot TRI reaģentu® (Sigma-Aldrich, Sentluisa, Misūri, ASV), reversā transkripcija kDNS un PCR amplifikācija, izmantojot TM One Step RT PCR komplektu ar SYBR green (Applied Biosystems, Grand Island, Ņujorka, ASV). Reālā laika kvantitatīvā PCR tika veikta, izmantojot Applied Biosystems 7500 reālā laika PCR sistēmu (Applied Biosystems, Grand Island, Ņujorka, ASV). Praimeru secības un zondes secība ir parādītas tabulā.1Parauga kDNS alikvotas un vienāds GAPDH kDNS daudzums tika amplificēti ar TaqMan® Universal PCR galveno maisījumu, kas satur DNS polimerāzi, saskaņā ar ražotāja norādījumiem (Applied Biosystems, Foster, CA, ASV). PCR apstākļi bija 2 minūtes 50°C temperatūrā, 10 minūtes 94°C temperatūrā, 15 sekundes 95°C temperatūrā un 1 minūte 60°C temperatūrā 40 ciklu garumā. Mērķa gēna koncentrācija tika noteikta, izmantojot salīdzinošo Ct (sliekšņa ciklu skaits krustpunktā starp amplifikācijas grafiku un slieksni) metodi saskaņā ar ražotāja norādījumiem.

FOB cena:0,5–9 999 ASV dolāri/gab.

Minimālais pasūtījuma daudzums:100 gab./gab.

Piegādes spēja:10000 gab./gab. mēnesī