Osteoartrīts (OA) ir viena no ilgstošām hroniskām deģeneratīvām kaulu locītavu slimībām, kas skar iedzīvotājus vecumā virs 65 gadiem.
1]. Parasti OA pacientiem tiek diagnosticēti bojāti skrimšļi, iekaisis sinovijs un erodēti hondrocīti, kas izraisa sāpes un fizisku diskomfortu [
2]. Artrīta sāpes galvenokārt izraisa locītavu skrimšļa deģenerācija iekaisuma rezultātā, un, ja skrimslis ir nopietni bojāts, kauli var viens ar otru sadurties, izraisot nepanesamas sāpes un fiziskas grūtības [
3]. Iekaisuma mediatoru iesaistīšanās ar tādiem simptomiem kā sāpes, pietūkums un locītavas stīvums ir labi dokumentēta. OA pacientiem sinoviālajā šķidrumā tiek konstatēti iekaisuma citokīni, kas izraisa skrimšļa un subhondrālā kaula eroziju [
4]. Divas galvenās sūdzības, kas parasti ir OA pacientiem, ir sāpes un sinoviālais iekaisums. Tāpēc pašreizējo OA terapijas galvenie mērķi ir sāpju un iekaisuma mazināšana. [
5]. Lai gan pieejamās OA ārstēšanas metodes, tostarp nesteroīdās un steroīdās zāles, ir pierādījušas savu efektivitāti sāpju un iekaisuma mazināšanā, šo zāļu ilgstošai lietošanai ir nopietnas sekas veselībai, piemēram, sirds un asinsvadu, kuņģa-zarnu trakta un nieru darbības traucējumi.
6]. Tādējādi osteoartrīta ārstēšanai ir jāizstrādā efektīvākas zāles ar mazākām blakusparādībām.
Dabiski veselības produkti kļūst arvien populārāki, jo tie ir droši un viegli pieejami [
7]. Tradicionālās korejiešu zāles ir pierādījušas savu efektivitāti pret vairākām iekaisuma slimībām, tostarp artrītu.
8]. Oklendas lappa DC. ir pazīstama ar savām ārstnieciskajām īpašībām, piemēram, uzlabo cji cirkulāciju sāpju mazināšanai un kuņģa nomierināšanai, un to tradicionāli izmanto kā dabisku pretsāpju līdzekli [
9]. Iepriekšējie ziņojumi liecina, ka A. lappa piemīt pretiekaisuma [
10,
11], pretsāpju līdzeklis [
12], pretvēža [
13] un gastroprotektīvs [
14] efekti. A. lappa dažādās bioloģiskās aktivitātes izraisa tās galvenie aktīvie savienojumi: kostunolīds, dehidrokostu laktons, dihidrokostunolīds, kostuslaktons, α-kostols, saussurea laktons un kostuslaktons [
15]. Iepriekšējie pētījumi apgalvo, ka kostunolīdam piemīt pretiekaisuma īpašības lipopolisaharīdā (LPS), kas inducēja makrofāgus, regulējot NF-kB un karstuma šoka proteīna ceļu.
16,
17]. Tomēr nevienā pētījumā nav pētītas A. lappa iespējamās aktivitātes OA ārstēšanā. Šajā pētījumā ir pētīta A. lappa terapeitiskā iedarbība pret OA, izmantojot (mononātrija jodacetāta) MIA un etiķskābes izraisītus grauzēju modeļus.
Mononātrija jodacetātu (MIA) plaši izmanto, lai radītu lielu daļu sāpju un OA patofizioloģisko īpašību dzīvniekiem.
18,
19,
20]. Injicējot ceļu locītavās, MIA izjauc hondrocītu vielmaiņu un izraisa iekaisumu un iekaisuma simptomus, piemēram, skrimšļa un subhondrālo kaulu eroziju, kas ir galvenie OA simptomi.
18]. Ar etiķskābi izraisītu raustīšanās reakciju plaši uzskata par perifēro sāpju simulāciju dzīvniekiem, kur iekaisuma sāpes var kvantitatīvi izmērīt.
19]. Peles makrofāgu šūnu līnija RAW264.7 tiek plaši izmantota, lai pētītu šūnu reakcijas uz iekaisumu. Aktivizējot ar LPS, RAW264 makrofāgi aktivizē iekaisuma ceļus un izdala vairākus iekaisuma starpniekus, piemēram, TNF-α, COX-2, IL-1β, iNOS un IL-6.
20]. Šajā pētījumā ir novērtēta A. lappa antinociceptīvā un pretiekaisuma iedarbība pret OA MIA dzīvnieku modelī, etiķskābes izraisītā dzīvnieku modelī un LPS aktivētās RAW264.7 šūnās.
2. Materiāli un metodes
2.1. Augu materiāls
Žāvēta A. lappa DC sakne. Eksperimentā izmantotais produkts tika iegādāts no Epulip Pharmaceutical Co., Ltd. (Seula, Koreja). To identificēja prof. Donguns Lī, Gašonas universitātes Korejas medicīnas pulkvedis, augu farmakoloģijas departaments, un kupona parauga numurs tika deponēts kā 18060301.
2.2. A. lappa ekstrakta HPLC analīze
A. lappa ekstrahēja, izmantojot atteces aparātu (destilēts ūdens, 3 h 100 °C). Ekstrahēto šķīdumu filtrēja un kondensēja, izmantojot zemspiediena iztvaicētāju. A. lappa ekstrakta iznākums bija 44,69% pēc žāvēšanas liofilizācijā zem –80 °C. A. lappa hromatogrāfiskā analīze tika veikta ar HPLC, kas savienota, izmantojot 1260 InfinityⅡ HPLC sistēmu (Agilent, Pal Alto, CA, ASV). Hromatiskajai atdalīšanai tika izmantota EclipseXDB C18 kolonna (4,6 × 250 mm, 5 µm, Agilent) 35 ° C temperatūrā. Kopumā 100 mg parauga tika atšķaidīti 10 ml 50% metanola un 10 minūtes apstrādāti ar ultraskaņu. Paraugi tika filtrēti ar šļirces filtru (Waters Corp., Milford, MA, ASV) ar 0, 45 μm. Kustīgās fāzes sastāvs bija 0,1% fosforskābe (A) un acetonitrils (B), un kolonna tika eluēta šādi: 0–60 min, 0%; 60–65 min, 100%; 65–67 min, 100%; 67–72 min, 0% šķīdinātājs B ar plūsmas ātrumu 1,0 ml/min. Izplūde tika novērota pie 210 nm, izmantojot 10 μL injekcijas tilpumu. Analīze tika veikta trīs eksemplāros.
2.3. Dzīvnieku izmitināšana un apsaimniekošana
Žurku tēviņi Sprague-Dawley (SD) vecumā no 5 nedēļām un tēviņi ICR peles vecumā no 6 nedēļām tika iegādāti no Samtako Bio Korea (Gyeonggi-do, Koreja). Dzīvnieki tika turēti telpā, izmantojot nemainīgu temperatūru (22 ± 2 ° C) un mitrumu (55 ± 10%) un gaismas / tumsas ciklu 12/12 h. Dzīvnieki ar stāvokli tika iepazīstināti vairāk nekā nedēļu pirms eksperimenta sākuma. Dzīvniekiem bija ad libitum barības un ūdens piegāde. Pašreizējie ētikas noteikumi par dzīvnieku aprūpi un apiešanos ar dzīvniekiem Gachon universitātē (GIACUC-R2019003) tika stingri ievēroti visās eksperimentu procedūrās ar dzīvniekiem. Pētījums tika izstrādāts pētnieku akls un paralēls izmēģinājums. Mēs ievērojām eitanāzijas metodi saskaņā ar Dzīvnieku eksperimentu ētikas komitejas vadlīnijām.
2.4. MIA injekcijas un ārstēšana
Žurkas tika nejauši sadalītas 4 grupās, proti, fiktīvas, kontroles, indometacīns un A. lappa. Žurkām tika anestēzēta ar 2% izofluorāna O2 maisījumu, izmantojot 50 μL MIA (40 mg/m; Sigma-Aldrich, Sentluisa, MO, ASV) intraartikulāri ceļa locītavās, lai izraisītu eksperimentālu OA. Ārstēšana tika veikta šādi: kontroles un viltus grupas tika uzturētas tikai ar AIN-93G pamata diētu. Tikai indometacīna grupai tika pievienots indometacīns (3 mg/kg), kas iekļauts AIN-93G diētā, un A. lappa 300 mg/kg grupai tika piešķirta AIN-93G diēta, kas papildināta ar A. lappa (300 mg/kg). Ārstēšana tika turpināta 24 dienas kopš OA indukcijas dienas ar ātrumu 15–17 g uz 190–210 g ķermeņa svara katru dienu.
2.5. Svara gultņu mērīšana
Pēc OA indukcijas žurku pakaļējo ekstremitāšu svara nestspējas mērījums tika veikts ar darbnespējas-MeterTester600 (IITC Life Science, Woodland Hills, CA, ASV), kā plānots. Aprēķināts svara sadalījums uz pakaļējām ekstremitātēm: svara nestspēja (%)
