Osteoartrīts (OA) ir viena no ilgstošām hroniskām deģeneratīvām kaulu locītavu slimībām, kas skar iedzīvotājus, kas vecāki par 65 gadiem.
1Parasti osteoartrīta pacientiem tiek diagnosticēti bojāti skrimšļi, iekaisis sinovijs un erodēti hondrocītu muskuļi, kas izraisa sāpes un fiziskas ciešanas [
2Artrīta sāpes galvenokārt izraisa locītavu skrimšļu deģenerācija iekaisuma rezultātā, un, ja skrimšļi ir nopietni bojāti, kauli var sadurties viens ar otru, izraisot nepanesamas sāpes un fiziskas grūtības [
3Ir labi dokumentēta iekaisuma mediatoru iesaistīšanās ar tādiem simptomiem kā sāpes, pietūkums un locītavas stīvums. Osteoartrīta pacientiem sinoviālajā šķidrumā ir atrodami iekaisuma citokīni, kas izraisa skrimšļa un subhondrālā kaula eroziju [
4Divas galvenās sūdzības, kas parasti ir OA pacientiem, ir sāpes un sinoviālais iekaisums. Tāpēc pašreizējo OA terapiju galvenie mērķi ir mazināt sāpes un iekaisumu.
5Lai gan pieejamās osteoartrīta ārstēšanas metodes, tostarp nesteroīdie un steroīdie medikamenti, ir pierādījušas savu efektivitāti sāpju un iekaisuma mazināšanā, šo zāļu ilgstoša lietošana rada nopietnas sekas veselībai, piemēram, sirds un asinsvadu sistēmas, kuņģa-zarnu trakta un nieru darbības traucējumus [
6Tādēļ osteoartrīta ārstēšanai ir jāizstrādā efektīvākas zāles ar mazāk blakusparādībām.
Dabiskie veselības produkti kļūst arvien populārāki, jo tie ir droši un viegli pieejami [
7Tradicionālajām korejiešu zālēm ir pierādīta efektivitāte pret vairākām iekaisuma slimībām, tostarp artrītu [
8Aucklandia lappa DC. ir pazīstama ar savām ārstnieciskajām īpašībām, piemēram, ci cirkulācijas uzlabošanu sāpju mazināšanai un kuņģa nomierināšanai, un tradicionāli to lieto kā dabisku pretsāpju līdzekli [
9Iepriekšējie ziņojumi liecina, ka A. lappa piemīt pretiekaisuma iedarbība [
10,
11], pretsāpju līdzeklis [
12], pretvēža [
13] un gastroprotektīvs [
14] ietekmi. A. lappa dažādās bioloģiskās aktivitātes izraisa tās galvenās aktīvās vielas: kostunolīds, dehidrokostunolīds, dihidrokostunolīds, kostuslaktons, α-kostols, saussūrijas laktons un kostuslaktons [
15Iepriekšējos pētījumos ir apgalvots, ka kostunolīdam lipopolisaharīdā (LPS) piemīt pretiekaisuma īpašības, kas inducēja makrofāgus, regulējot NF-kB un karstuma šoka proteīna ceļu [
16,
17Tomēr nevienā pētījumā nav pētīta A. lappa potenciālā aktivitāte osteoartrīta (OA) ārstēšanā. Šajā pētījumā ir pētīta A. lappa terapeitiskā iedarbība pret OA, izmantojot (mononātrija jodacetāta) MIA un etiķskābes izraisītus grauzēju modeļus.
Mononātrija jodacetāts (MIA) ir plaši pazīstams kā līdzeklis, kas dzīvniekiem izraisa sāpes un osteoartrīta patofizioloģiskās pazīmes.
18,
19,
20Kad MIA tiek injicēts ceļa locītavās, tas izjauc hondrocītu metabolismu un izraisa iekaisumu un iekaisuma simptomus, piemēram, skrimšļa un subhondrālā kaula eroziju, kas ir osteoartrīta galvenie simptomi [
18Ar etiķskābi izraisīta locīšanās reakcija tiek plaši uzskatīta par perifēro sāpju simulāciju dzīvniekiem, kur iekaisuma sāpes var kvantitatīvi izmērīt [
19Peles makrofāgu šūnu līnija RAW264.7 tiek plaši izmantota, lai pētītu šūnu atbildes reakciju uz iekaisumu. Aktivējot ar LPS, RAW264 makrofāgi aktivizē iekaisuma ceļus un izdala vairākus iekaisuma starpniekus, piemēram, TNF-α, COX-2, IL-1β, iNOS un IL-6 [
20Šajā pētījumā tika novērtēta A. lappa antinociceptīvā un pretiekaisuma iedarbība pret OA MIA dzīvnieku modelī, etiķskābes izraisītā dzīvnieku modelī un LPS aktivētās RAW264.7 šūnās.
2. Materiāli un metodes
2.1. Augu materiāls
Eksperimentā izmantotā žāvētā A. lappa DC. sakne tika iegūta no Epulip Pharmaceutical Co., Ltd. (Seula, Koreja). To identificēja Gačonas Universitātes Korejas medicīnas koledžas Augu izcelsmes farmakoloģijas katedras profesors Donghuns Lī, un čeka parauga numurs tika deponēts kā 18060301.
2.2. A. lappa ekstrakta HPLC analīze
A. lappa ekstrahēja, izmantojot atteces aparātu (destilēts ūdens, 3 stundas 100 °C temperatūrā). Ekstrahēto šķīdumu filtrēja un kondensēja, izmantojot zemspiediena iztvaicētāju. A. lappa ekstrakta iznākums pēc saldžāvēšanas −80 °C temperatūrā bija 44,69%. A. lappa hromatogrāfiskā analīze tika veikta ar HPLC, kas pievienota, izmantojot 1260 InfinityⅡ HPLC sistēmu (Agilent, Pal Alto, CA, ASV). Hromatogrāfiskajai atdalīšanai tika izmantota EclipseXDB C18 kolonna (4,6 × 250 mm, 5 µm, Agilent) 35 °C temperatūrā. Kopumā 100 mg parauga atšķaidīja 10 ml 50% metanola un apstrādāja ar ultraskaņu 10 minūtes. Paraugi tika filtrēti ar 0,45 μm šļirces filtru (Waters Corp., Milford, MA, ASV). Mobilās fāzes sastāvs bija 0,1 % fosforskābe (A) un acetonitrils (B), un kolonna tika eluēta šādi: 0–60 min, 0 %; 60–65 min, 100 %; 65–67 min, 100 %; 67–72 min, 0 % šķīdinātājs B ar plūsmas ātrumu 1,0 ml/min. Notekūdeņi tika novēroti pie 210 nm, izmantojot injekcijas tilpumu 10 μL. Analīze tika veikta trīs eksemplāros.
2.3. Dzīvnieku izmitināšana un pārvaldība
No Samtako Bio Korea (Gyeonggi-do, Koreja) iegādātas piecu nedēļu vecas tēviņu Sprague-Dawley (SD) žurkas un sešu nedēļu vecas tēviņu ICR peles. Dzīvnieki tika turēti telpā, kurā tika nodrošināta nemainīga temperatūra (22 ± 2 °C) un mitrums (55 ± 10%), kā arī 12/12 stundu gaismas/tumsas cikls. Dzīvnieki tika iepazīstināti ar šiem apstākļiem vairāk nekā nedēļu pirms eksperimenta sākuma. Dzīvniekiem tika nodrošināta neierobežota barības un ūdens padeve. Visās dzīvnieku eksperimentālajās procedūrās tika stingri ievēroti Gachonas universitātes spēkā esošie ētikas noteikumi par dzīvnieku aprūpi un apiešanos (GIACUC-R2019003). Pētījums tika plānots kā pētniekam akls un paralēls pētījums. Eitanāzijas metode tika izmantota saskaņā ar Dzīvnieku eksperimentālās ētikas komitejas vadlīnijām.
2.4. MIA injekcija un ārstēšana
Žurkas tika nejauši sadalītas 4 grupās: placebo, kontroles, indometacīna un A. lappa. Žurkām, kurām tika veikta anestēzija ar 2% izofluorāna O2 maisījumu, ceļa locītavās intraartikulāri injicēja 50 μL MIA (40 mg/m2; Sigma-Aldrich, Sentluisa, Misūri, ASV), lai izraisītu eksperimentālu osteoartrītu (OA). Ārstēšana tika veikta šādi: kontroles un placebo grupām tika dota tikai AIN-93G pamata diēta. Tikai indometacīna grupai tika dots indometacīns (3 mg/kg), kas iekļauts AIN-93G diētā, un A. lappa 300 mg/kg grupai tika piešķirta AIN-93G diēta, kas papildināta ar A. lappa (300 mg/kg). Ārstēšana tika turpināta 24 dienas no OA indukcijas dienas ar ātrumu 15–17 g uz 190–210 g ķermeņa masas dienā.
2.5. Svara nestspējas mērīšana
Pēc OA indukcijas žurku pakaļkāju nestspējas mērīšana tika veikta ar incapacitance-MeterTester600 (IITC Life Science, Woodland Hills, CA, ASV), kā plānots. Svara sadalījums uz pakaļkājām tika aprēķināts: nestspēja (%)
